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Ecuación de Michaelis-Menten; ¿Cómo encontrar las constantes a partir de los resultados experimentales de la actividad enzimática?

Ecuación de Michaelis-Menten; ¿Cómo encontrar las constantes a partir de los resultados experimentales de la actividad enzimática?


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Me preguntaba qué significan realmente las constantes de la ecuación de Michaelis-Menten en los datos experimentales de enzimas. ¿Cómo proceso los datos para encontrar Km y Kcat?

Hice un experimento sobre la catalasa y su descomposición del peróxido de hidrógeno. Usé un sensor de presión de gas para rastrear cuánto O2 se produjo a partir de la reacción a lo largo del tiempo. El siguiente es un ejemplo de un diagrama sin procesar de lo que encontré. El punto 0 es cuando puse el sustrato y comenzó la reacción (así que creo que puedo llamar a esto la "cantidad máxima de concentración de sustrato"; en el gráfico de Michaelis-Menten, debería estar en el extremo derecho).

Para encontrar la velocidad de la reacción en cada punto, pensé en encontrar las pendientes entre cada punto, lo que básicamente equivale a encontrar la derivada. Dado que el gráfico sin procesar que encontré parece una función de logaritmo, predeciría que la derivada se vería como una hipérbola (con x> 0). De hecho, este es el gráfico (crudo) de la "derivada" del gráfico anterior, que parece una hipérbola:

Creo que Kmax es el valor y del primer punto de este gráfico: la velocidad inicial cuando el sustrato se mezcla con la enzima. La concentración de sustrato es máxima en el tiempo 0 y la concentración de sustrato disminuye a medida que aumenta el tiempo.

Entonces pensé, para hacer el gráfico de Michaelis-Menten, debería invertir el eje x para que la concentración de sustrato aumente a lo largo del eje x. Sin embargo, mi problema fue que si hago esto, el gráfico no se parecerá a la curva de Michaelis ...

Lo que hubiera querido encontrar es la curva de Michaelis-Menten, de modo que también pueda derivar los valores de Km y Kcat. ¿Alguien sabe como hacer esto? ¿O estoy haciendo mal mis pasos? ¡Muchas gracias por ayudarme!

Curva de Michaelis-Menten:


¿Tiene datos para diferentes concentraciones de peroxodo de hidrógeno?

Si es así, debe elegir un punto de tiempo que se encuentre en la parte lineal de su gráfico de tiempo. Y grafique la tasa en ese momento para cada concentración de sustrato.

Eso le dará una curva MM donde podrá calcular los valores que desee. No puede calcularlos solo con los datos de tiempo que ha proporcionado.


Ver el vídeo: Cinética enzimática: Michaelis menten el Km y la Vmax, la mejor explicación. (Julio 2022).


Comentarios:

  1. Roano

    Idea magnífica

  2. Cashel

    Me uno. Entonces sucede. Discutamos esta pregunta.

  3. Pavlov

    Bravo, palabras... que otra idea

  4. Ewert

    Hablaremos.



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