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¿Cómo se usa C. Elegans para transmitir genes?

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El experimento que utiliza C. Elegans para silenciar a los genes. Tengo una pregunta sobre ¿Por qué y cómo C. Elegans puede usar el plásmido de ADN que se genera con el gen de interés en la bacteria al ser alimentado con la bacteria?


Por la forma en que describió su experimento, alimentando bacterias C.elegans que expresan un plásmido que inducirá el silenciamiento del gen, entonces, tanto @Kendall como yo creo que probablemente esté realizando un experimento de RNAi (interferencia).

Como escribe @Kendall:

Si es en lo que estoy pensando, probablemente tenga gusanos GFP + que terminan siendo alimentados

DH5-α E. coli que se transformaron usando CaCl2. El resultado es que los gusanos de control deben tener una buena fluorescencia y los gusanos experimentales tendrán un color notablemente más débil. El proceso de RNAi se explica muy bien en ese enlace proporcionado por AMR. - Kendall

Las bacterias transcribirán moléculas de ARN codificadas por el plásmido de ADN. Estos ARN tendrán secuencias complementarias a las secuencias de su gen de interés.

Cuando el nematodo se come a la bacteria, las células del gusano absorberán las moléculas de ARN que ha producido la bacteria.

La enzima Dicer luego escinde el dsRNA en pequeños fragmentos. Estos fragmentos luego pueden hibridar con los ARNm transcritos del gen de interés. Esto hará que los ribosomas no se unan correctamente o que comience la traducción fuera del marco o sin aminoácidos clave o terminará la traducción antes de tiempo.

El efecto neto es que las células no producirán la proteína codificada por el gen de interés o producirán una proteína no funcional. Si, como dijo @Kendall, el gen de interés es un gen reportero como GFP, entonces el resultado del experimento de interferencia será C.elegans que no emitirá fluorescencia. Si el gen de interés es una proteína estructural como la actina, verá los efectos de anular el gen de la actina en las células del gusano.

Este protocolo de vídeo en línea de JoVE.com ofrece una descripción detallada de la ARNi en C.elegans experimento y también demuestra cómo se lleva a cabo el protocolo.


Ver el vídeo: LOGRAN ALARGAR LA VIDA DE UN SER VIVO UN 500% - Caenorhabditis elegans (Agosto 2022).